ответ:
область изобретения
это изобретение относится к области биотехнологии. в частности, относится к повышению посттранскрипционного контроля экспрессии гена в эукариотических клетках.
уровень техники
после транскрипции первичных мрнк с днк экспрессия эукариотических генов проходит несколько этапов контроля. первичный транскрипт мрнк включает в себя кодирующие (экзоны) и некодирующие (интроны) зоны. во время сплайсинга мрнк интроны транскрипта вырезаются и удаляются, а экзоны соединяются вместе, образуя зрелую матричную рнк (мрнк). сплайсинг служит контрольным этапом в продуцировании множественных изоформ белка отдельного гена посредством дополнения и удаления экзонов в разных комбинациях. этот процесс, называемый альтернативным сплайсингом, происходит в четко регулируемых, многокомпонентных структурах, называемых сплайсосомами, которые находятся под внутриклеточных и внеклеточных сигнальных путей.
при добавлении к щелочному раствору белка раствора сернокислой меди жидкость приобретает красно-фиолетовый или сине-фиолетовый цвет. реакция обусловлена присутствием в белке пептидных связей, которые с ионами меди образуют окрашенное комплексное соединение. в щелочной среде кетонная форма полипептида переходит в енольную.
енольная форма полипептида взаимодействует со щелочным раствором медной соли с образованием так называемого биуретового комплекса.
интенсивность окраски зависит от длинны пептида и варьирует от сине-фиолетовой до красно-фиолетовой. положительную реакцию соединения, содержащие не менее двух пептидных связей.
ход работы:
в одну пробирку налить 2 мл раствора яичного белка, в другую столько же раствора желатина. затем в каждую прибавить равный объем 10%-ного раствора едкого натра и по 2-3 капли 1%-ного раствора сернокислой меди сuso4. проявляется красно-фиолетовое окрашивание.
опыт 2. нингидриновая реакция на α-аминокислоты
эта реакция обусловлена присутствием в белке аминокислот, имеющих аминогруппу в α-положении.
белки, пептиды и аминокислоты образуют с нингидрином соединение синего или сине-фиолетового цвета. α-аминокислоты, реагируя с нингидрином, окисляются и с образованием аммиака, альдегида и углекислого газа. нингидрин восстанавливается и конденсируется с другой молекулой нингидрина и аммиаком. в результате образуется сложное соединение, окрашенное в синий цвет /пурпурный руэмана/.
реакция может быть представлена следующим образом:
ход работы:
в одну пробирку налить 1-2 мл 1%-ного раствора глицина, в другую столько же раствора яичного белка. в обе пробирки добавить 0,1-ный спиртовый раствор нингидрина (в первую пробирку 5-6 капель, во вторую 10-12 капель) и нагревать около минуты. в пробирке с глицином быстро появляется сине-фиолетовое окрашивание. в пробирке с белком окраска более бледная красно-фиолетовая и развивается медленнее.
опыт 3. ксантопротеиновая реакция на циклические аминокислоты
ксантопротеиновая реакция характерна для некоторых ароматических аминокислот (фенилаланина, тирозина, триптофана). при нагревании белков, содержащих эти аминокислоты, с концентрированной азотной кислотой образуется соединение желтого цвета:
на второй стадии нитропроизводное реагирует с гидроксидом аммония с образованием аммонийной соли желто-оранжевого цвета.
ксантопротеиновую реакцию, кроме белков, пептидов и циклических аминокислот, также многие простые ароматические соединения (бензол, фенол др.)
ход работы:
1. к 2 мл 0,1%-ного раствора фенола осторожно по стенке прилить 1-2 мл концентрированной азотной кислоты и осторожно нагреть. появляется желтое окрашивание.
2. в другую пробирку налить 2 мл яичного белка, прибавить 8-10 капель концентрированной азотной кислоты и осторожно нагреть. выпадает осадок, который окрашивается в желтый цвет.
после охлаждения в пробирку осторожно по стенке приливают избыток концентрированного раствора аммиака. жидкость приобретает желто-оранжевый цвет.
реакцию проводят под тягой!
3. те же реакции проводят с раствором желатина. однако желтое окрашивание с ней не появляется, так как желатин не содержит ароматических аминокислот.
